篇一：邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告
实验一、邻二氮菲分光光度法测定微量铁
2009级医学检验 3组 吴茳铃 2009221885
实验目的和要求
1、 掌握紫外可见分光光度计的基本操作；
2、 掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法； 3、 掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择； 4、 掌握标准曲线绘制及应用。
实验原理
邻二氮菲（1,10—邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe形成红色配位离子
2+
Fe
2+
2+
+
3
N
N
Fe
3
在pH=3~9范围内，该反应能够迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1×104，反应十分灵敏，Fe2+ 浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。
实验中，采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。
实验仪器与试剂
1. 752S型分光光度计2. 标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L） 3. 邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）4. 盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制） 5. NaAC缓冲溶液 6. 50ml容量瓶7个 8.1cm玻璃比色皿2个 9. 铁样品溶液
实验步骤
1、 标准系列溶液及样品溶液配制，按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液。
用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在各个波长处的吸光度，绘制吸收曲线，并找出最大吸收波长。
绘图如下：
选择的最大吸收波长为：λmax = 510nm
3、 标准曲线制作
在选定最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2至7号溶液的吸光度，平行测定3次，计算吸光度平均值，绘制标准曲线。
绘制标准曲线：
实验数据处理
1、 样品中铁的计算
Cx=C读取值×50.00/2.50=0.05×20=1×10(mol/L)
2、 摩尔吸光系数计算
在标准曲线的直线部分选择量两点，读取对应的坐标值，计算邻二氮菲配位物在最大吸收波长出的摩尔吸光系数：
ε=(A2－A1)/(c2－c1)=(0.461—0.233)/(0.04×10-3—0.02×10-3)=1.14×104L/(mol·cm)
-3
实验讨论
1、 查资料红色配位物的摩尔吸光系数与实验计算一致，影响成败的关键可能有：标准液和样品液的配置不准、分光光度计使用不当。
2、 比色皿在换装不同浓度的溶液时，必须用待测的溶液润洗至少三次。 3、 注意分光光度计的正确操作。
4、 PH值影响配位物的解离程度，故缓冲液要适量。
5、 比色皿放入分光光度计样品室钱，必须用吸收纸将表面擦拭干净。
指导老师：颜玉蓉
时间：2011 年10月
篇二：综合实验报告 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
一、实验目的
⒈学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理； ⒉掌握721型分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。 二、实验原理
⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件。
⒊本试验测定工业盐酸中铁含量的原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc。当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即工业盐酸中铁的含量。
⒋邻二氮菲法的优点：用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
⒌邻二氮菲法简介： 邻二氮菲为显色剂，选择测定微量铁的适宜条件和测量条件，并用于工业盐酸中铁的测定。
⒍邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据：邻二氮菲亦称邻菲咯啉(简写phen)，是光度法测定铁的优良试剂。在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物((Fe(phen)3)2+)。
此配合物的lgK稳= 21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：
2 Fe3+ + 2 NH2OH·HCl → 2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl-
测定时控制溶液的酸度为pH≈5较为适宜，用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。 三、仪器试剂
⒈仪器：721型分光光度计；1cm吸收池；10mL 吸量管；50mL 比色管(7个)。
⒉试剂：1.0×10-3 mol·L-1 铁标准溶液；100μg·mL-1铁标准溶液；0.15%邻二氮菲水溶液；10%盐酸羟胺溶液(新配)；1mol·L-1乙酸钠溶液；1 mol·L-1NaOH溶液；6 mol·L-1 HCl(工业盐酸试样)。 四、实验步骤
(一)准备工作
打开仪器电源开关，预热，调解仪器。
(二)测量工作(以通过空白溶液的透射光强度为I0，通过待测液的透射光强度为I,由仪器给出透射比T,再由T值算出吸光度A值)
⒈吸收曲线的绘制和测量波长的选择
用吸量管吸取2.00 mL 1.0×10-3mol·(本文来自：wwW.xIaocAofanwEn.coM 小草 范文 网:邻二氮菲测铁实验报告)L-1铁标准溶液，注入50mL比色管中，加入1.00mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，加入2.00 mL 0.15%邻二氮菲溶液，5.0 mLNaAc溶液，以水稀释至刻度。在光度计上用1 cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，在440～560 nm间，每隔10 nm测量一次吸光度(在最大吸收波长处，每隔2nm)，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的适宜波长。
⒉显色剂条件的选择(显色剂用量)
在6支比色管中，各加入2.00mL 1.0×10-3mol·L-1铁标准溶液和1.00mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀。分别加入0.10，0.50，1.00，2.00 ，3.00及4.00mL 0.15%邻二氮菲溶液，5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在光度计上用1cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，测吸光度。以邻二氮菲体积为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-试剂用量曲线，从而确定最佳显色剂用量。
⒊工业盐酸中铁含量的测定 ⑴标准曲线的制作
在6支50mL比色管中，分别加入0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL 100μg/mL铁标准溶液，再加入1.00mL 10%盐酸羟胺溶液，2.00mL 0.15%邻二氮菲溶液和5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在512nm处，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，测吸光度A。
⑵试样测定
准确吸取适量工业盐酸三份，按标准曲线的操作步骤，测定其吸光度。 五、实验数据记录与处理
⒈标准曲线的制作
根据上面数据，作得标准曲线图如下：
由作图可知，最大吸收波长为512nm。 ⒉显色剂用量的测定
邻二氮菲用量曲线：(λ=512 nm) 由图可知，显色剂最佳用量为2.00 mL 0.15%邻二氮菲溶液。
3.工业盐酸中铁含量的测定
⑴标准曲线的制作
标准曲线方程为 y=0.2216*x-0.0061 R2=0.98 ⑵试样测定(工业盐酸铁含量的测定)
，即稀释后工业盐酸中铁的含量为0.4116μg/mL，0.5889μg/mL。
由1.0* Cx2/50 = 0.4116，得Cx1=20.58(μg/mL) 由1.5 Cx3/50 = 0.5889， 得 Cx2=19.63(μg/mL) 则Cx=(Cx1+ Cx2)/2= (20.58+19.63)/2 = 20.11(μg/mL) RSD=3.34%
所以，工业盐酸中铁的含量为20.11μg/mL。
小结：通过实验数据可知，最适宜波长为λ=512nm；邻二氮菲(0.15%)的适宜用量为2mL；最终由标准曲线得工业盐酸中铁的含量为：20.11μg/mL。
六、实验注意事项
⒈不能颠倒各种试剂的加入顺序。
⒉读数据时要注意A和T所对应的数据。透射比与吸光度的关系为:A=log(I0/I)= log(1/T)；测定条件指：测定波长和参比溶液的选择。
⒊最佳波长选择好后不要再改变。 ⒋每次测定前要注意调满刻度。 七、思考题
1邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要加入盐酸羟胺溶液？
答：工业盐酸中含有Fe2+和Fe3+，其中Fe2+与邻二氮菲(phen)能生成稳定的桔红色配合物
[Fe(phen)3]2+此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 =1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，然后，进行铁的总量的测定 。 2参比溶液的作用是什么？在本实验中可否用蒸馏水作参比？
答：参比溶液的作用是扣除背景干扰，不能用蒸馏水作参比，因为蒸馏水成分与试液成分
相差太远，只有参比和试液成分尽可能相近，测量的误差才会越小。 3邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有哪些？
答：邻二氮菲与铁的显色反应，其主要条件有：酸度一般(pH=5~6)、温度、 邻二氮菲的
用量，显色时间等。 八、实验总结
通过本实验，学习了确定实验条件的方法，再次熟悉了可见分光光度法的测量原
理和实验操作步骤,掌握了邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理以及掌握721
型分光光度计的使用方法。
篇三：邻二氮杂菲分光光度法测定铁 实验报告
分析化学实验报告
实验题目：
邻二氮杂菲分光光度法测定铁
学 院：
专 业：食品科学与工程 班 级： 姓 名： 学 号： 同组者姓名：
一．实验目的
1.了解分光光度法测定物质含量的一般条件及其选定方法 2.掌握邻二氮杂菲分光光度法测定铁的方法 3.了解722型分光光度计的构造和使用方法
二．实验原理
1.光度法测定的条件：分光光度法测定物质含量时应注意的条件主要是 显色反应的条件和测量吸光度的条件。显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸
度、显色时溶液温度、显色时间及干扰物质的消除方法等;测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。
2.在PH=2-9的条件下，Fe2+与邻二氮杂菲（o-ph）生成极稳定的橘红色配合物，反应式如下：
此配合物的lgK稳 =21.3 摩尔吸收系数ε
510
=1.1×104
在显色前，首先用盐酸羟胺把Fe2+ 还原成Fe3+.其反应式如下： 2Fe 3+ +2NH 2 OH· HC1 ＝2Fe 2+ +N 2 ↑+2H 2 O+4H + +2C1-
测定时，控制溶液酸度在PH=5左右较为适宜。酸度过高时，反应进行较慢;酸度太低，则Fe 2+水解，影响显色。
三、实验仪器
分光光度计、容量瓶、移液管、洗瓶
四、实验步骤 1.条件实验
（1）吸收曲线的测绘准确吸取20 μg·mL-1铁标准溶液5 mL于50 mL容量瓶中，加入5%盐酸羟胺溶液1 mL，摇匀，加入1 mol·L-1NaOAc溶液5 mL和0.1%邻二氮杂菲溶液3 mL。以水稀释至刻度，摇匀。放置10 min，在722型分光光度计上，用1 cm比色皿，以水为参比溶液，波长从570 nm到430 nm为止，每隔10 nm测定一次吸光度。如图1所示，其最大吸收波长为510 nm，故该实验选择测定波长为510 nm。
（2）邻二氮杂菲-亚铁配合物的稳定性
用上面溶液继续进行测定，其方法是在最大吸收波长510 nm处，每隔一定时间测定其吸光度，及再加入显色剂后立即测定一次吸光度，经10、20、30、120 min后，再各测一次吸光度。
（3）显色剂浓度实验 取50 mL容量瓶7只，编号。每只容量瓶中准确加入20 ug·mL-1铁标准溶液5 mL以及1mL5%盐酸羟胺溶液，经2 min后。再加入5 mL1 mol·L-1NaOAc溶液，然后分别加入0.1%邻二氮杂菲溶液0.3mL、0.6mL、1.0 mL、1.5 mL、2.00 mL、3.0 mL和4.0 mL，用水稀释至刻度，摇匀，在分光光度计上，用最大吸收波长510 nm、1 cm比色皿，以水为参比，测定上述溶液的吸光度。
2.铁含量的测定 （1）标准曲线的绘制
取50mL容量瓶6只，编号。分别吸取20 μg·mL-1铁标准溶液2.0mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL于5只容量瓶中，另一只容量瓶中不加标准溶液（配制空白溶液，作参比）。然后各加5%盐酸羟胺溶液，摇匀，经2 min后，再各加5 mL1 mol·L-1NaAc溶液及3 mL1 g·L-1邻二氮杂菲溶液，以水稀释至刻度线，摇匀。放置10 min，在分光光度计上，用1 cm比色皿，在510 nm处，测定各溶液的吸光度。以铁含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 （2）未知液中铁含量的测定
吸取5ml未知液代替标准溶液，其他步骤均同上测定吸光度。由未知液的吸光度在标准曲线上查出5ml未知液中的铁含量，然后以每毫升未知液中含铁多少微克表示结果。
五、记录与计算
（1）吸收曲线的测绘
讨论：从曲线可以看出，在一定范围内，当波长较小时，随波长增加吸光度增加。测定的适宜波长是510nm。
（2）邻二氮杂菲亚铁配合物的稳定性
讨论：从曲线可以看出，配合物稳定性较好。
(3) 显色剂用量的测定
讨论：当显色剂较小时，随显色剂含量增加吸光度增加，当加入显色剂为1.5ml吸光度最大。所以显色剂的适宜加入的量为1.5ml