篇一：微生物可行性报告
利用植物内生真菌研制抗肿瘤药物
姓名：夏慧颖 学号：200706250220 班级：食品072
1.产品意义和经济效益
近年来,随着各种各样的癌症和对药物具有抗性的病原菌的出现,人类的健康受到严重的威胁。目前针对各种癌症疾病，主要采用手术、化疗、放疗、生物治疗等综合措施，但其疗效难以令人满足。人们更加渴望获得更多新型、疗效更为显著的药物。
紫杉醇作为肿瘤治疗的优良药物已被世人接受,对卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤具有突出的疗效,。传统靠砍伐红豆衫树木生产紫杉醇已决无可能;而人工种植红豆衫生产紫杉醇, 也遇到成本、生产周期长等一系列难题。所以目前市场上紫杉醇奇缺, 奇贵。1993年,美国蒙大拿州立大学Strobel从短叶紫杉(Taxus breviforlia)分离到一株内生真菌,它能与宿主植物产生同一产物———肿瘤治疗剂紫杉醇,扩大了药用微生物资源的范围,从而植物内生菌的研究开始迅速发展，为微生物生产紫杉醇带来了一线曙光, 并掀起了从内生菌寻找药物先导化合物的热潮。
植物内生菌是一种新的微生物资源,广泛分布于低等植物和高等植物。近年来通过内生菌途径得到的活性物质不仅种类繁多,而且有许多未开发的新化合物,其中一些化合物在抗菌、抗肿瘤、抗病毒等方面有较高的活性,引起广大科学工作者的重视。这对于从天然药用植物中提取有用产物带来的资源短缺、生态平衡破坏,甚至物种灭绝将起到有效缓解作用,也为植物资源的合理利用提供了参考。
2.国内外研究进展
最早提出内生菌概念的是Bary,此后大约100年间,内生菌的研究进展缓慢。直到1993年Stierle等从短叶红豆杉的韧皮部分离得到一株能产生紫杉醇的内生真菌一安德氏紫杉霉, 发现其发酵产物中也能分离出紫杉醇,.随后不断有新的研究报道推出。
2000年, 南京大学等研究发现传统中药青篙内生菌印能够产生新的生物活性物质。国外，Wagenaar等从来源于传统中药雷公藤的内生真菌的培养液中分离出种新的生物碱,并且它们均是具有细胞毒作用的细胞分裂抑素, 实验结果表明它们对多种人肿瘤细胞有很强的抑制作用;同时该项目组成员于2001年从濒临灭绝的薄荷Dicerandra frutescens中分离出的内生菌能产生3种新的具有抗肿瘤活性的二聚物.1999-2003年, 我国学者张玲琪等分别从植物长春花、桃儿七等植物中分离到产抗癌药物长春新碱和鬼臼毒素类似物的内生菌, 从美登木叶中分离到株球毛壳菌, 从该菌的发酵产物中提取出抗癌活性物质球毛壳甲素A。 [2]
近几年,南京师范大学陈双林等从银杏坛树叶中分离得到一株内生真菌, 经鉴定为刺盘饱, 应用薄层层析、显色反应及分光光度法对该菌的发酵产物进行了初步分析, 结果表明该真菌能够产生黄酮类化合物。李桂玲等也从药用植物南方红豆杉、、三尖杉和香榧 中分离到25株内生真菌对人口腔上皮癌细胞KB和人白血病HL-60细胞具有显著的抑制活性。李洁等从爵床Rostellularia procum bens中分离到2株有较强抗癌活性的细菌YIM 56081和YIM 56077,活性检测表明,2株菌的代谢产物均具有较强的抗癌活性,作者对其进行了形态学特征、生长及生理生化特性、化学分类和系统发育等方面的研究;泰国学者从藤黄属植物中分离出5种内生真菌,并对这些内生真菌产生的65种次生代谢产物活性进行了测定,其中有11. 1%的代谢产物具有抗人肺癌NCI2H187细胞活性,有12. 7%的代谢产物抗人口腔表皮样癌KB细胞。
时至今日，已从云南红豆杉、、西藏红豆杉、、中国红豆杉、南方红豆杉等红豆杉植物树皮中先后分离出多个产紫杉醇或其类似物的内生真菌菌株。我国也从东北红豆杉、尹根、茎、叶中分离获得种内生真菌, 经形态学和ITS分析, 确认分别属于子囊菌亚门的3个属和半子囊菌亚门的23个属, 表明东北红豆杉内生真菌具有丰富的物种多样性, 其中有4个菌种能产紫杉醇 。目前，从药用植物内生菌中寻找到的抗肿瘤活性成分至少10种以上,主要有萜类(紫杉醇、紫杉烷等)、生物碱类(长春新碱、细胞松弛素等)、鬼臼毒素类、黄酮类等。 [6][4][6][5][2]
3.生产工艺流程
3.1材料
3.1.1 植物材料。成熟健康云南红豆杉植株
3.1.2 培养基。马铃薯葡萄糖培养基马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂20 g,水1 000ml。
3.2植物内生真菌分离、培养
3.2.1内生真菌的分离。
先用自来水将所采集的红豆杉植物组织表面冲洗干净,晾干水分后分别切取根、茎和叶,采用下述方法进行表面消毒[6]:浓度0. 1%升汞漂洗(10~30 s)→无菌水冲洗数次→浓度75%酒精漂洗(30~60 s)→无菌水冲洗数次。在无菌操作条件下取根、茎和叶,切成0. 2 cm×0.2 cm长段(片),接种于加青霉素的PDA培养基中,在(28±1)℃条件下置于温箱静置培养3~7 d。同时将上述经表面灭菌的材料不经任何处理直接接种于加青霉素的PDA培养基中,在(28±
1)℃条件下置于温箱培养,检查表面消毒是否彻底。
3.2.2内生菌的纯化。 [7]
对内生真菌,取切口处新长出的菌丝,及时转接至新鲜PDA培养基上。培养数日后,观察菌落的形态及其菌落边缘的整齐情况,并作相应的记录。对菌株编号后,转至新鲜箱斜面培养基上,于28℃培养箱中培养5~7 d,然后放入4℃冰箱保存。
3.2.3拮抗菌活性的测定。
拮抗菌活性测定采用对峙培养法。在超净工作台上进行无菌操作:将直径6 mm的供试病原真菌的菌块接种于PDA培养基的培养皿中央,再用直径6mm的打孔器在生长7 d左右的内生真菌菌落边缘制备菌饼,并接种于PDA平板上距中心2 cm处同一直线的2点上,对照不接筛选菌,28℃下培养72 h,测量各筛选菌菌落边缘和病原菌菌落边缘之间的抑菌距离,选择拮抗作用明显的菌进行复筛或鉴定。试验重复2次,每次设3个重复。
3.3提高植物内生真菌代谢活性
3.3.1常规诱变。
对能产生紫杉醇的内生真菌——树状多节孢孢子进行一系列的诱变、筛选，获得突变衍生株NCEU-1，其紫杉醇产量为314.07μɡ/L.
3.3.2原生质体诱变。
利用原生质体诱变获得遗传稳定、高产菌株UL04-5，其紫杉醇产量提高到418.24μɡ/L。
3.3.3双亲灭活原生质体融合。
采用双亲灭活原生质体融合方法改良的菌种，其紫杉醇产量可达468.62μɡ/L。 [5][7]
4. 效益分析
我国药用植物种类丰富,其中蕴涵有丰富的可用内生菌资源。目前已从47科83属120余种药用植物中分离出内生菌。这些研究发现掀起了一场从药用植物中分离内生菌的热潮,并且通过利用植物内生菌进行发酵生产得到了某些重要的天然药物,为解决某些药用植物生长缓慢、资源紧缺等引起的药源匮乏和生态破坏问题提供了新思路。将内生菌的研究与药用植物研究相结合,应用生物组合化学的方法进行活性成分的筛选和研究,发现有特色的新的高效先导化合物,提高药用植物活性成分的含量和产量,对推动药用植物的研究开发及中药资源的可持续利用具有重要意义。
5. 参考文献
[1]《植物内生菌活性成分研究进展》邓义熹, 张亚雄，涂璇——安徽农业科学, 2009年 24期
[2]《药用植物内生菌研究概况》崔宇,郑春英,刘松梅，吴丹——黑龙江医药, 2007年 01期
[3]《产生物活性物质植物内生菌的研究进展》李海燕，刘丽——天然产物研究与开发, 2004年 05期
[4]《药用植物内生菌的生物多样性及活性成分》黄宝康，秦路平——药学实践杂志, 2006年 04期
[5]《药用植物内生菌在天然药物开发中的应用》乔卿梅，程茂高，王长林——郑州牧业工程高等专科学校学报, 2008年 01期
[6]《抗肿瘤药用植物及其内生菌活性代谢产物的研究》李端,郭利伟,郭伟云,李延兰——安徽农业科学, 2009年 16期
[7]《云南红豆杉内生菌的分离及拮抗植物病害菌的筛选》郑法新,程璐,李侠,房保海——安徽农业科学, 2009年 24期
[8]《内生菌与天然产物》黎万奎,胡之璧——中国天然药物,2005 ,3
[9]《植物内生菌资源》姜 怡,杨 颖，陈华红，李文均，徐丽华，刘志恒——微生物学通报, 2005年 06期
篇二：微生物可行性报告 浙江工业大学
微生物枕头的可行性探索
生(原文来自：wWw.xiaOcAofANweN.coM 小 草 范 文 网:微生物可行性报告)工1003班 浙江工业大学
一． 产品的社会意义
枕头中有数百万真菌，其中最常见的曲霉菌最有可能引发疾病。曲霉菌是导致白血病和骨髓移植病人死亡的一个主要的传染因素。而且对于患有哮喘病的成年人来说，这种真菌也会使他们的病情恶化。并能引起有过敏倾向病人的过敏窦炎。研究人员对枕头里的材料取样研究后发现，在人们使用的枕头里含有大量的真菌，每一克枕头材料里就有几千个真菌孢子，平均每只枕头里含有100万个以上的真菌孢子。
17日科学杂志《过敏症》的网站公开了这项最新研究结果。研究人员对10个枕头取样进行研究，这些枕头平均使用寿命从1年半到20年不等。研究人员在每个枕头里都发现了大量真菌孢子，每个样品里的孢子又分为4到16个不同的种类。尤其是在化纤枕头中，研究人员发现了更多的真菌。
领导这项研究的阿什雷·伍德科克教授说：“我们都知道，房间里的灰尘微生物是寄生在枕头上的，而这些寄生虫以真菌为食，所以，一种理论是，真菌利用房子里灰尘虫的排泄物作为获取氮和其它营养物质的一个主要来源，因此在我们的枕头内可能有一个小型‘生态系统’在运作。”
因此枕头的卫生对我们的身体健康十分重要。而开发一种能抑制微生物生长的枕头就非常具有社会价值和意义。所以我设想能探索开发一种能抑制微生物生长且有改善人身体健康的微生物枕头。
二. 微生物枕头原理：
双歧杆菌体内有结合黄曲霉素能力，从而减少了枕头上的有害微生物。双歧杆菌还能改善肠道，能诱导肿瘤细胞的凋亡而达到抑制肿瘤生长的作用；可以抑制乙肝病毒，促进大、小三阳转阴；影响胆固醇的代谢，对高血压和动脉硬化有一定的防治作用等等。
三．国内外研究状况：
1.荆楚网消息（楚天金报）由英国真菌研究信托基金会资助的曼彻斯特大学的研究人员发现，数百万的真菌孢子就藏在我们的枕头里。
2. 记忆枕头采用聚醚型聚氨酯（上世纪六十年代由美国太空总署（NASA）的下属企业美国康人（HEALTHMAN）公司所研发，是一种开放式的细胞结构、具有温感减压的特性，也可以称作为是一种温感减压材料），具有防菌抗螨，慢回弹海绵抑制霉菌生长，驱除霉菌繁殖生长产生的刺激气味，当有汗渍唾液等情况下，显得更为突出。
因此总体上来说虽然有对枕头微生物的研究，也有采用特殊化学材料的主要用于紧密适合脊椎的生理曲线，解除颈椎肌肉、韧带的疲劳。还没有采用其他微生物来抑制枕头中的微生物的研究。
四．构建高产菌的技术路线：
1.采集菌种
用接种环粘取婴儿粪便接种于疤肉培养基, 置37 ℃ 厌氧培养2d, 疤肉培养基成分Χ 牛肉浸液与牛肉渣体积比为3:1, 酵母膏0.5%, 写, 培养基ph7.6,压强0.1Mpa,灭菌30min。
2. 菌种分离
培养基成分：蛋白陈1.0%，酵母膏0.5%，, 磷酸二氢钾0.25%,可溶性淀粉0.25%, 大豆 蛋白陈0.3%,, 硫乙醇酸钠0.03%,半耽氨酸盐0.03%,琼脂1.5%,ph7.3,0.1Mpa 灭菌
30min。,m用此培养基制成平板, 用于菌种分离,将疤肉培养基培养的菌种接种于平板，,并用划线分离法分离，然后放置在厌氧袋内，于37 ℃ 厌氧培养2d,选取菌落为圆形, 菌落直径为1mm左右, 表面较光滑、呈灰白色、不透明的菌株进一步鉴定。
对被选菌落的菌体进行革兰氏阳性染色后镜检, 挑选呈直形或微弯状、并排列成V型、Y 型和栅状或短链状的菌体进一步鉴定。包括需氧性生长检验、淀粉液化能力检、乙酞甲基甲醇试验和甲基红试、触酶检测、 明胶液化能力检测、硝酸盐还原能力检测、吲哚试验检测、糖和醇发酵检测、动物急性毒性试验等来确定所分离的菌株为双歧杆菌。
五．生产该产品工艺流程：
双歧杆菌溶液
双歧杆菌制剂 制作双歧杆菌培养基 将制剂与培养基放在一起，外包装为柔软物（可放进枕头）
六：经济效益分析
预计年常量200万瓶，每瓶20元，则年利润为1000万。
七、产品标准
该产品要符合一般微生物的安全标准，无毒无害。另外，由于它是高科技生活品，必须符合使用过程中的安全标准。
参考文献： 1.《微生物学教程》第二版 周德庆主编 高等教育出版社
2.《微生物实验指导手册》
3. 雷妹、谢达平、罗泽民，双歧杆菌的分离与鉴定，湖南农学院学报第21 卷第2期，1995
篇三：微生物可行性报告
项目名称：微生物杨梅保鲜技术 主管部门：浙工大生环学院
承担单位：待定
承担单位负责人及联系电话：待定
建设地点：待定
编写人员：柏玉奕
联系电话 ：15068827592 编写时间：2011年5月31日
一、摘要：梅是我国特有的水果，其果实由许多柔软多汁、表皮极薄、顶端突起的肉柱组成，而且采后呼吸旺盛、衰老进程很快，又成熟于梅雨季节，所以极不耐贮藏和运输杨梅的保鲜期很短，极易变质，所以杨梅的长途运送及贮藏一直是一个难以解决的问题。本项目研究利用微生物来延长杨梅的保鲜期，从而使商家获得更高的利益。本项目所采用的是微生物是嫌气性蜡样杆菌，将它经过低温处理后制成菌粉，与杨梅按一定的重量比例掺入到杨梅中，搅拌均匀后密封，再放入温度为4—5℃的恒温室中一段时间，然后可用一般的冷藏运送技术运往各地。这种微生物可以在杨梅表面形成一层生物膜，将杨梅与外界空气隔绝，从而抑制杨梅呼吸氧化劣变，达到优质保鲜的目的，并且对人体有益无害。
二、必要性分析
1、与杨梅保鲜相关的重要生理变化据研究，杨梅果实的超氧物岐化酶（SOD）具有维持活性氧化代谢平衡、保护膜结构的功能，起到保护新鲜果实的作用；但丙二醛（MDA）则是膜脂过氧化的中间产物，影响细胞膜的结构和正常生理代谢，不利于杨梅的保鲜。在杨梅果实上试验表明，采收后6天SOD活性明显下降而MDA则上升。此外，杨梅果实属呼吸强度高的一类果品，由于呼吸消耗使果实糖分损失，乙烯的排放量增加也将显著地降低果实品质。以上的几种生理变化与温度高低密切相关，在温度升高的条件下，使SOD下降，MDA上升，呼吸强度上升，严重影响果实贮藏期和果实质量。当今延长保鲜期的办法，主要是采取降低温度和呼吸强度以及有害微生物的繁衍。在杨梅鲜果贮藏过程中不断放出乙烯，
使果品趋向衰老，组织解体，营养物质分解损失，如采取抑制或去除乙烯的措施，将明显延长果品的保鲜期。
2、目前，速冻低温贮藏是杨梅贮藏的主要途径。而长途运输的工具最好是冷藏汽车，但在缺乏这种设备的条件下，产区常应用冰块冷却运输，所用的设备和材料包括预冷冷库、白色泡沫塑料箱、薄膜包装袋、冰块以及隔热保温材料等。冷藏汽车保温效果一般，如果结合其他方法的话相信会更好。
3、杨梅是中国的特产，运用先进的保鲜技术使杨梅走向世界，开发国外市场对我国杨梅产业的发展很重要。
4、现在正是杨梅的成熟季节，如果能够开发成功并马上投入使用的话，对于今年的杨梅市场会有很大的影响，使杨梅种植商和水果商从中获得更高的利益。
三、可行性分析：
1、本项目主要采用的是嫌气性蜡样杆菌，这是一种厌氧菌，与杨梅以一定比例混合后可以在杨梅表面形成一层生物膜，从而隔绝了杨梅与外界的空气交流，降低其呼吸作用，达到保鲜的效果。这种嫌气性蜡样杆菌目前仅用于茶叶的保鲜，在茶叶的保鲜上还没有得到开发。2、另外由于杨梅的变质，乙烯是很重要的因素，因此可以在每箱杨梅中放入一带乙烯吸收剂。乙烯吸收剂是由海南可菲尔生物科技有限公司申请的专利，至今还未用于杨梅的保鲜。此发明乙烯吸收剂，其特征在于：乙烯吸收剂是由沸石、高锰酸钾、消石灰即熟化干燥石灰粉、膨胀珍珠岩和硅溶胶配制组
成。本发明乙烯吸收剂的优点具有吸收和氧化乙烯、硫化氢、二氧化硫、烟味、甲醛及吸收多种有机气体和碳酸气体并具有耐水等功能，保鲜效果好，周期长，广泛适用各种果蔬及花卉产品和保藏。制成后把乙烯吸收剂分装入透气薄膜袋中并封口然后臵于杨梅箱中即可。这种乙烯吸收剂效果明显，可以很好的吸收乙烯，从而进一步降低杨梅变质的速度。
3、在运输和贮藏的过程中，再结合冰冻冷藏，对于杨梅而言最好是零摄氏度左右最佳。三种方法结合，综合减缓杨梅变质，显著延长杨梅保鲜期。
4、嫌气性蜡样杆菌可通过工厂自行培养获得，培养方便，成本低，而且有益无害。
四、市场供求分析及预测
目前,我国杨梅主要分布在长江流域以南东经97°～122°、北纬20°～33°之间,经济种植主要分布在浙江、福建、广东、江苏、江西、云南、四川、贵州、重庆、湖南、安徽和广西等12个省(市、区),台湾省、陕西省汉中市及甘肃省武都市等地因有特殊小气候,也有少量分布。全国杨梅种植面积150万hm2,年产量100万t左右,均居世界第1位。国外仅日本栽培有少量杨梅,质量尚可;印度、斯里兰卡、缅甸、越南、泰国、韩国、菲律宾和尼泊尔等国有全缘叶杨梅分布,但果小味酸,仅作果酱或药用;欧美等国家多引种作庭园观赏。据不完全统计，截止2001年底，我国杨梅栽培的总面积约320万亩，约占全国水果总面积的26％。浙江省杨梅栽培的总面积约为70万亩，年总产量为21万吨，比1985年（26万亩，462万
吨）分别增长了62.9％、78.0％，增长势头非常明显。但是,我国杨梅产业还是一个稚嫩产业,规模扩张过快,销售相对集中,综合开发相对滞后,这些都影响杨梅产业的健康发展。杨梅用途广泛，市场潜力巨大。杨梅树姿优美，叶色浓绿，15年生左右健壮的杨梅树冠，己被园林工程用作观赏性绿化苗。杨梅枝叶冬季绿色，不落叶，己被鲜切花店冬季用作配叶（切叶），还出口到日本。杨梅的新鲜枝叶不易燃烧，可作为森林防火带种植，防上森林火灾。杨梅的叶、根与枝干表皮富含单宁（含量高达10％～19％），可提炼黄酮类与香精油物质，用作赤褐色及医疗上的收敛剂。杨梅的核仁中含有维生素B17，这是一种抗癌物质，还含粗蛋白32％、粗脂肪21％，被称为高蛋白、高植物油脂食品，可供炒食或榨袖。此外，杨梅具有消食、御寒、消暑、止泻、利尿、治痢疾以及生津上渴、清肠胃、除烦愤恶气等多种药用价值，我国的医学界对此有较高评价。而且在正常情况下,杨梅市场价格是苹果、柑桔和荔枝的3～4倍,加之栽培管理比较简单,因此,农民种植杨梅的积极性较高,杨梅已成为山区农民脱贫致富奔小康的重要收入来源。所以杨梅的市场需求较大，潜力很大，前景美好。因此开发好的杨梅保鲜技术很重要。而目前采用的多是药剂处理，气调保鲜和速冻冷藏，保鲜效果一般。市场急需一种新的有显著保鲜效果的保鲜剂来应对杨梅的广阔的市场需求。
五、项目承担单位的基本情况
预计项目承担单位应是杨梅高产地的果农果商等，如浙江本土。
六、项目承担地点分析