篇一：细菌简单染色法
生物实验简单染色
峰峰高中生物组
适用微生物染色原理
简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。
其它情况分析：
常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
使用草酸铵结晶紫染色液，染色迅速，着色深，菌体呈紫色。
一|、步骤
1、涂片
1. 取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水；
2. 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔；
3. 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
2、干燥
将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。
3、固定
手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。 原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。
注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。
4、染色
将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。
染色时间：吕氏碱性美蓝染色1~2min；石炭酸复红染色约1min；草酸铵结晶紫染色约1min。
5、水洗
将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。
注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。
6、干燥
自然干燥：平放于室温，自然干燥；
吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干；
吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。
二、配方
1、吕氏碱性美蓝染液
溶液A 美蓝0.6克；95%乙醇 30毫升
溶液B 氢氧化钾0.01克；蒸馏水 100毫升 分别配制溶液A和B 配好后混合即可。
2、石碳酸复红液：称取碱性复红10g，研细，加95％乙醇100ml，放置过夜，滤纸过滤。取该液10ml，加5％石碳酸水溶液90ml混合，即为石碳酸复红液。再取此液10ml加水90ml即为稀石碳酸复红液。
3、草酸铵结晶紫染液
A液：结晶紫(crystal violet) 1g，95%酒精20ml
B液：草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g，蒸馏水80ml
混合A、B二液，静置48小时后使用。
篇二：细菌的简单染色和革兰氏染色实验
细菌的简单染色和革兰氏染色实验
实验目的
1. 学习微生物涂片，染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。、
2. 巩固显微镜的使用方法。
基本原理
1. 简单染色法:用单一染料对细菌进行染色的方法。此法操作简单，适用于一般形态的观察。
在中性，碱性或酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易于带负电荷的细菌结合而是细菌着色。带正电的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。通常的碱性染料除了美蓝外，还有结晶紫，碱性复红，番红等。细菌体积较小，较透明，如未经染色常不易识别，而经染色后与背景形成鲜明的对比，是易于在显微镜下观察。
2. 革兰氏染色法:将所有的细菌分成革兰氏阳性菌G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌
上最常用的鉴别染色法。该染色法所以将细菌分为G+和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙酸溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使染色的结晶紫和碘的复合物易于渗透，结果细菌被脱色，在经复红染色后就成了红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时颜色。
革兰氏染色需要四种不同的溶液，碱性染料初染液，煤染剂，脱色剂和复染液。碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或付着力，即已某种方式帮助染料固定在细胞上，是不易脱落，碘是常用的媒染剂。脱色剂是被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染剂，复染的目的是使被脱落的细胞染上不同于初染液的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的染色液是复红。
器材
1. 活材料，培养24小时的大肠杆菌和葡萄球菌。
2. 染色液和试剂，碱性美兰，结晶紫，碘页，95%酒精，石炭酸复红，蒸馏水，乙醚-乙醇
混合液，香柏油。
3. 器材，废液缸，洗瓶，载玻片，接种杯，酒精灯，擦镜纸和显微镜。
操作步骤
1. 涂片，取干净的载玻片与实验台上，在正面边角作记号，并滴一滴无菌蒸馏水与载玻片
中央，灼烧接种杯，待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混均后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。
2. 干燥，干燥过程最好在空气中自然晒干，为了加速干燥，也可以在微小火焰上方烘干。
烘干后再在火焰上方快速通过3-4次，使菌体完全固定在载玻片上。但不宜在高温下长时间烤干，否则急速失水会使菌体变形。
3. 染色，滴加草酸铵结晶紫染色1-2min,染色液量以盖满菌膜为宜。
4. 水洗，倾去染液，斜置载玻片，用水冲去多余染液，直至流出的水呈无色为止。
5. 干燥，用微热烘干或自然晾干。
6. 镜检，按显微镜的操作步骤观察细菌形态，及时记录，并进行形态图绘制。
革兰氏染色
各种细菌经革兰氏染色法染色后，能区分成两大类，一类最终染色成紫色，称为革兰
氏阳性细菌G+,另一类被染成红色，称革兰氏阴性细菌G-。
操作步骤
1. 涂片，固定。同简单染色法。
2. 初染
滴加草酸铵结晶紫染色1-2min,水洗。
3. 媒染
滴加革兰氏碘液，染1-2min,水洗。
4. 脱色
滴加体积分数为95%的乙醇，约45S后水洗；或滴加体积分数为95%的乙醇后将玻片摇晃几下即倾去乙醇，如此重复2-3次后即水洗。
5. 复染
滴加沙皇液(番红)，染2-3min,水洗并使之干燥。
6. 镜检
同简单染色，并根据呈现的颜色判断该菌属是G+细菌还是G-细菌，也可与已知菌对照。观察时先用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察。
注意事项
1. 涂片所用载玻片要洁净无油污迹，否则影响涂片。
2. 挑菌量应少些，涂片易薄，过厚重叠的菌体则不易观察清楚。
3. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应甩去玻片上的残水以免染色液被稀释而影
响染色效果。
4. 革兰氏染色成败的关键是脱色时间时候合适，如果脱色过度，革兰氏阳性细菌也可以被
脱色而被误认为是革兰氏阴性细菌。而脱色时间过短革兰氏阴性细菌则会被误认为是革兰氏阳性细菌。脱色时间的长短还受涂片的薄厚，脱色时玻片晃动的程度等因素的影响。
篇三：实验1 显微镜的使用和简单染色
实验一 显微镜的使用和简单染色
一、实验目的：
1. 了解并掌握细菌简单染色的机理及技术；
2. 学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理：
细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学
显微镜难以看清它们的形态结构。所以，先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。常用碱性染料进行简单染色，
这是因为碱性染料电离后带有正电荷，很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料：
1. 菌种：枯草杆菌Bacillus subtilis、大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphyloccus aureus等培养好的细菌斜面；
2. 染料和试剂：美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油
3. 器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤：
1. 涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm2。
2. 干燥：室温自然干燥
3. 固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。此操作也称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。
4. 染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色1min左右。
5. 水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲洗在涂菌处，直至载片上流下的水无色为止。
6. 干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。
7. 镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。
五、注意事项
1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜。2.不准
擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏
3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。
4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用
油镜时，切不可使用粗(转自：wWw.XiAocAoFanWeN.cOm 小 草 范文网:简单染色实验报告)调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
5.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左
眼观察时，右眼注视绘图。
6.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。
7. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀
释而影响染色效果。
六、实验报告
1. 结果
绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的形态图，注明放大倍数、及观察到的颜色。
2. 思考题（任选两题）
（1）使用油镜时，为什么必须用香柏油？应特别注意哪些问题？
（2）油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？对同一微生物制片，用油镜观察比用低倍镜观察有何优、缺点？
（3）镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？
（4）涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？